Məhsullar
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 2019-nCoV üçün aşkarlama dəsti
Gözlənilən istifadə
Bu dəst boğaz tamponları, nazofarengeal tamponlar, bronxoalveolyar yuyulma mayesi, bəlğəmdən istifadə etməklə yeni koronavirusun (2019-nCoV) keyfiyyətcə aşkarlanması üçün istifadə olunur. klinik diaqnostika və müalicə üçün sübut.Vəziyyətin hərtərəfli təhlili xəstənin klinik təzahürləri və digər laboratoriya testləri ilə birlikdə tövsiyə olunur.
Yoxlama prinsipi
Kit bir addımlı RT-PZR texnologiyasına əsaslanır.Əslində, 2019-cu ilin yeni koronavirusu (2019-nCoV) ORF1ab və N genləri gücləndirmə hədəf bölgələri olaraq seçilmişdir.Xüsusi primerlər və flüoresan zondlar (N gen zondları FAM ilə etiketlənir və ORF1ab zondları HEX ilə etiketlənir) nümunələrdə 2019 yeni növ koronavirus RNT-ni aşkar etmək üçün nəzərdə tutulub.Kit həmçinin nümunə toplama, RNT və PCR gücləndirmə prosesini izləmək və bununla da yanlış mənfi nəticələri azaltmaq üçün endogen daxili nəzarət aşkarlama sistemini (CY5 ilə etiketlənmiş daxili nəzarət gen zondu) ehtiva edir.
Əsas komponentlər
| Komponentlər | Həcmi（48T/Dəst) |
| RT-PCR reaksiya məhlulu | 96μl |
| nCOV primeri TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864μl |
| Mənfi nəzarət | 1500µl |
| nCOV Müsbət nəzarət（l ORF1ab N Geni） | 1500µl |
Öz reagentləri: RNT ekstraksiya və ya təmizləyici reagentlər.Mənfi/müsbət nəzarət: Müsbət nəzarət hədəf fraqmenti ehtiva edən RNT, mənfi nəzarət isə nuklein turşusu olmayan sudur.İstifadə zamanı onlar ekstraksiyada iştirak etməli və yoluxucu hesab edilməlidir.Onlar müvafiq qaydalara uyğun idarə edilməli və utilizasiya edilməlidir.
Daxili istinad geni insan RnaseP genidir.
Saxlama şəraiti və son istifadə tarixi
-20±5℃, 5 dəfədən çox təkrar dondurulma və ərimədən çəkinin, 6 ay ərzində etibarlıdır.
Tətbiq olunan alət
FAM / HEX / CY5 və digər çoxkanallı flüoresan PCR aləti ilə.
Nümunə tələbləri
1.Tətbiq olunan nümunə növləri: boğaz tamponları, nazofarengeal tamponlar, bronxoalveolyar yuyucu maye, bəlğəm.
2.Nümunələrin toplanması (aseptik texnika)
Faringeal tampon: Badamcıqları və faringeal arxa divarı eyni vaxtda iki tamponla silin, sonra tampon başlığını nümunə götürmə məhlulu olan sınaq borusuna batırın.
Bəlğəm: Xəstədə dərin öskürək olduqdan sonra öskürülmüş bəlğəmi nümunə götürmə məhlulu olan vintli qapaqlı sınaq borusuna toplayın;bronxoalveolar yuyulma mayesi: Tibbi mütəxəssislər tərəfindən nümunə götürülməsi.3.Nümunələrin saxlanması və daşınması
Virus izolyasiyası və RNT testi üçün nümunələr mümkün qədər tez sınaqdan keçirilməlidir.24 saat ərzində aşkarlana bilən nümunələr 4℃ temperaturda saxlanıla bilər;24 ərzində aşkar edilə bilməyənlər
saat -70 ℃ və ya aşağı temperaturda saxlanılmalıdır (əgər -70 ℃ saxlama şəraiti yoxdursa, onlar
-20 ℃ soyuducuda müvəqqəti saxlanılır).Nümunələrin daşınması zamanı təkrar dondurulması və əriməsinin qarşısını almaq lazımdır.Nümunələr toplanandan sonra mümkün qədər tez laboratoriyaya göndərilməlidir.Nümunələrin uzun məsafələrə daşınması lazımdırsa, quru buzun saxlanması tövsiyə olunur.
Test üsulları
1 Nümunə emalı və RNT çıxarılması (nümunə emalı sahəsi)
RNT çıxarılması üçün 200μl maye nümunə götürmək tövsiyə olunur.Müvafiq ekstraksiya addımları üçün kommersiya RNT ekstraksiya dəstlərinin təlimatlarına baxın.Həm mənfi, həm də mənfi
bu dəstdə olan nəzarət elementləri çıxarışda iştirak edirdi.
2 PCR reagentinin hazırlanması (reagentin hazırlanması sahəsi)
2.1 Bütün komponentləri dəstdən çıxarın və otaq temperaturunda əridin və qarışdırın.İstifadədən əvvəl bir neçə saniyə 8000 rpm-də santrifüj edin;reagentlərin tələb olunan miqdarını hesablayın və reaksiya sistemi aşağıdakı cədvəldə göstərildiyi kimi hazırlanır:
| Komponentlər | N porsiya (25µl sistem) |
| nCOV primeri TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR reaksiya məhlulu | 2 µl × N |
| *N = sınaqdan keçirilmiş nümunələrin sayı + 1 (mənfi nəzarət) + 1 (nCOVmüsbət nəzarət) | |
2.2 Komponentləri hərtərəfli qarışdırdıqdan sonra borunun divarındakı bütün mayenin borunun dibinə düşməsi üçün qısa müddətə sentrifuqa edin və sonra 20 µl gücləndirmə sistemini PZR borusuna ayırın.
3 Nümunə götürmə (nümunə hazırlama sahəsi)
Çıxardıqdan sonra 5μl mənfi və müsbət nəzarət elementləri əlavə edin.Sınaq ediləcək nümunənin RNT-si PCR reaksiya borusuna əlavə edilir.
Borunun qapağını möhkəm bağlayın və gücləndirmə aşkarlama sahəsinə köçürməzdən əvvəl bir neçə saniyə ərzində 8000 rpm-də sentrifuqa edin.
4 PCR gücləndirilməsi (gücləndirilmiş aşkarlama sahəsi)
4.1 Reaksiya borusunu cihazın nümunə hücrəsinə yerləşdirin və parametrləri aşağıdakı kimi təyin edin:
| mərhələ | Velosiped nömrə | Temperatur(°C) | Vaxt | kolleksiyaSayt |
| Terstranskripsiya | 1 | 42 | 10 dəq | - |
| Əvvəlcədən denaturasiyan | 1 | 95 | 1dəq | - |
| Velosiped | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | məlumatların toplanması |
Alət aşkarlama kanalının seçimi: Floresans siqnalı üçün FAM、HEX、CY5 kanalını seçin.İstinad flüoresan YOX üçün, lütfən, ROX seçməyin.
5 Nəticə təhlili (Lütfən, quraşdırma üçün hər bir alətin eksperimental təlimatlarına baxın)
Reaksiyadan sonra nəticələri qeyd edin.Təhlildən sonra başlanğıc dəyərini, bitmə dəyərini və başlanğıc dəyərini şəklə uyğun olaraq tənzimləyin (istifadəçi faktiki vəziyyətə uyğun olaraq tənzimləyə bilər, başlanğıc dəyəri 3 ~ 15 olaraq təyin edilə bilər, bitmə dəyəri 5~20, tənzimləmə) loqarifmik qrafikdə Pəncərənin astanasında hədd xətti loqarifmik fazada, mənfi nəzarətin gücləndirmə əyrisi isə düz xətt və ya eşik xəttindən aşağıdır).
6 Keyfiyyətə nəzarət（Prosedur nəzarəti testə daxildir） Mənfi nəzarət: FAM, HEX, CY5 aşkarlama kanalları üçün aydın gücləndirmə əyrisi yoxdur.
COV müsbət nəzarəti: FAM və HEX aşkarlama kanallarının aşkar gücləndirmə əyrisi, Ct dəyəri≤32, lakin CY5 kanalının gücləndirmə əyrisi yoxdur;
Yuxarıdakı tələblər eyni təcrübədə eyni vaxtda yerinə yetirilməlidir;əks halda, təcrübə etibarsızdır və təkrar etmək lazımdır.
7 Nəticələrin müəyyən edilməsi.
7.1 Əgər sınaq nümunəsinin FAM və HEX kanallarında gücləndirmə əyrisi yoxdursa və ya Ct dəyəri > 40-dırsa və CY5 kanalında gücləndirmə əyrisi varsa, 2019-cu ilin yeni koronavirusunun (2019-nCoV) olmadığı qənaətinə gəlmək olar. Nümunədə RNT;
.2 Əgər sınaq nümunəsinin FAM və HEX kanallarında aşkar gücləndirmə əyriləri varsa və Ct dəyəri ≤40-dırsa, nümunənin 2019-cu ilin yeni koronavirusu (2019-nCoV) üçün müsbət olduğu qənaətinə gəlmək olar.
7.3 Əgər sınaq nümunəsi FAM və ya HEX-in yalnız bir kanalında aydın gücləndirmə əyrisinə malikdirsə və Ct dəyəri ≤40-dırsa və digər kanalda gücləndirmə əyrisi yoxdursa, nəticələr yenidən yoxlanılmalıdır.Yenidən test nəticələri uyğun olarsa, nümunənin yeni üçün müsbət olduğuna qərar verilə bilər
koronavirus 2019 (2019-nCoV).Yenidən test nəticəsi mənfi olarsa, nümunənin 2019-cu ilin yeni koronavirusu (2019-nCoV) üçün mənfi olduğu qənaətinə gəlmək olar.
Müsbət mühakimə dəyəri
ROC əyri metodu dəstin istinad CT dəyərini təyin etmək üçün istifadə olunur və daxili nəzarət istinad dəyəri 40-dır.
Test nəticələrinin şərhi
1.Hər bir təcrübə mənfi və müsbət nəzarət üçün sınaqdan keçirilməlidir.Test nəticələri yalnız nəzarət keyfiyyətə nəzarət tələblərinə cavab verdikdə müəyyən edilə bilər
2.FAM və HEX aşkarlama kanalları müsbət olduqda, sistem rəqabəti səbəbindən CY5 kanalından (daxili nəzarət kanalı) nəticə mənfi ola bilər.
3.Daxili nəzarət nəticəsi mənfi olduqda, sınaq borusunun FAM və HEX aşkarlama kanalları da mənfi olarsa, bu, sistemin sıradan çıxması və ya əməliyyatın səhv olması deməkdir, t test etibarsızdır.Buna görə də nümunələr yenidən sınaqdan keçirilməlidir.
